免疫反応を起こすにはいくつかのステップがあり、グルテンが存在するときの陽性反応にも、グルテンを除去したときの抗体のクリアにも時間がかかる。 そのため、「どの程度、どの程度の期間チャレンジすべきか」という点については、多くの議論がなされており、統一見解は得られていないのが現状です。 医師と相談してください。 私の個人的な感覚では、正確な検査をするためには、1日2切れのパンを6週間続けるのが最低ラインだと思いますが、医師の言うことを鵜呑みにするのはやめましょう。 セリアック病の診断に役立つ検査は、基本的に4つあります。 セリアック病の診断に役立つと言ったことに注意してください。 免疫学はかなり正確ですが、正確な科学というには程遠いものです。 すべての検査は、その種類や出所にかかわらず、診断の補助として提示されています。 これらの検査は、単独で診断の根拠として使用されるべきではなく、むしろ、訓練を受けた医師による患者の身体検査や報告された症状などと合わせて考慮されることを意図しています。 検査が何であるかについては、これまでにも多くの混乱がありましたが、その誤解を少しでも和らげることができればと思います。 tTG、IgA、IgG、ELISAなど、耳にする用語はたくさんあります。 これらはすべて何なのでしょうか？ 投稿者の中には、IgAやIgG検査、あるいはELISA検査に言及する人もいます。

私たちは皆、体内に、抗体として作用することができる、同一ではないが密接に関連したタンパク質のファミリーをもっています。 これらは総称して免疫グロブリンと呼ばれています。 ヒトの成人には、通常、5種類の免疫グロブリンが存在する。 それらは、IgG、IgA、IgM、IgE、IgDである。 これらはそれぞれ、免疫グロブリンガンマG（またはA、Mなど）の略語であり、私たちのシステムにおいてそれぞれ異なる機能を果たしています。 IgGは、ヒト血清中の主要な免疫グロブリンである。 胎盤関門を通過するため、発育中の胎児に免疫を与える上で重要である。 IgA は、呼吸器や腸の粘膜から分泌される主要な免疫グロブリンです。 IgE は、腸管および呼吸器を覆う細胞によって産生されるガンマグロブリンである。 IgEは、ほとんどの過敏症（アレルギー）反応に関連する抗体を産生する。 喘息や花粉症などに関連する。 IgM は、ほとんどすべての免疫反応において、反応の初期に形成されるグロブリンである。 IgDは、正常な血清中に微量に存在する希少なタンパク質です。 これらの呼称は、当該抗体を担っているタンパク質の種類を意味しています。 抗グリアジン抗体にはIgG型とIgA型があり、IgG型グリアジン、IgA型グリアジンと呼んでいる。

抗グリアジン抗体：

グルテン感受性腸症（セリアック病）患者の血清には、IgAおよびIgG抗グリアジン抗体（AGA）が検出されます。 IgG抗グリアジン抗体はIgAクラスの抗体に比べて感度は高いが、疾患の特異的なマーカーとしては劣る。 IgA型抗グリアジン抗体は、IgA型抗体に比べて感度は低いが、特異性は高い。 臨床試験では、IgA抗体の特異度は97％であるが、感度は71％に過ぎない。 つまり、IgAが陽性であれば、97％の確率でセリアック病であることを意味します。 逆に、IgAが陰性であれば、本当にセリアック病が陰性である確率は71%に過ぎない。 したがって、陽性であればセリアック病である可能性が高いが、陰性であればセリアック病でない可能性が高いということになる。 偽陽性は稀ですが、偽陰性は起こり得ます。 一方、IgG抗グリアジン抗体は、特異度91％、感度87％です。 つまり、より容易に陽性結果を示すが、セリアック病との相関はそれほど強くない。 特異度が低いのです。 セリアック病に罹患していないが、他の疾患を持つ患者が、時折、陽性結果を示すことがある。 IgG抗グリアジン抗体は、他の消化器疾患の患者の約21%に検出されます。 この検査は偽陽性をもたらすかもしれないが、偽陰性をもたらす可能性は低い。

感度の高い検査プロトコルには、セリアック患者のかなりの部分（約2-5％）がIgA欠損であるため、IgAおよびIgG抗グリアジン抗体の両方を検査することが含まれている。 このIgAとIgG抗グリアジン抗体の複合アッセイは、全体の感度が95％、特異度が90％である。 抗グリアジン抗体を検出するために使用される検査の種類は、ELISAと呼ばれます。 これは頭文字をとったもので、Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assayの略です。 ELISAはそれ自体が検査ではありません。 ELISAは検査そのものではなく、検査方法の一つであり、比較的簡単に行える検査です。 希釈した患者さんの血清を特別に用意したプレートのウェルに計量して入れ、様々な化学物質とともに一定時間インキュベートするものです。 その結果、色の変化が生じ、その強さは患者血清中の抗グリアジン抗体（または測定対象の他のタンパク質）の濃度に依存する。 この着色溶液の特定の波長の光を吸収する能力を実験室で測定し、既知の量の抗グリアジン抗体を含む溶液と数学的に比較し、抗体の存在量を数値化することが可能である。 これにより、試料は陰性（0～20単位）、弱陽性（21～30単位）、中～強陽性（30単位以上）に分類されます。 抗グリアジン抗体検査の目的は、グルテン感受性腸症の診断に加え、グルテンフリー食の遵守状況をモニタリングすることにあります。 IgAグリアジン抗体は、食事中のグルテンに反応して急速に増加し、食事からグルテンを取り除くと急速に減少する。 IgA抗グリアジン抗体は、グルテンフリー食では2〜6ヶ月で完全に消失するため、食事管理として有用である。 一方、IgG抗グリアジン抗体は、陰性化するまでに長い時間、時には1年以上必要です。 逆もまた真なりである。 つまり、セリアック病の患者さんで、グルテンフリーの食事をしていてIgA抗グリアジン抗体が陰性でも、食事中のグルテンにチャレンジすると、抗体産生が急速に増加するのです。 グルテンに暴露された患者の約90％が、暴露後14〜35日以内にIgA抗グリアジン抗体陽性となる。 IgG抗体はやや緩やかです。

IgAクラスの抗エンドミシアル抗体（AEA）は、セリアック病とDHにのみ存在する非常に特異的な抗体です。 これらの抗体は、DH患者の約80％、活動性セリアック病患者のほぼ100％に認められます。 IgAエンドミシアル抗体は、セリアック病の診断において、グリアジン抗体よりも感度が高く、特異的である。 抗体価（希釈度）は、空腸の形態学的変化と並行していることが判明しており、グルテンフリー食の遵守状況を反映するためにも使用される。 抗エンドミシアル抗体の検査は、抗グリアジン検査よりも主観的で、検査室にとってはより複雑な検査である。 患者の血清の一部を連続的に希釈します。つまり、1/2、1/4、1/8、1/16などで希釈し、これらの希釈液を、ある種の組織を貼り付けたスライドグラスに乗せます。 その後、スライドを様々な溶液で処理し、蛍光顕微鏡で観察して、血清のどれかが組織中のタンパク質のどれかと結合するかどうかを判断する。 もし結合すれば、その患者はその特定のタンパク質に対する抗体を持っていると確認される。 この検査方法は、IFA または IIFA と呼ばれています。 間接免疫蛍光法（Indirect Immuno-Fluorescent Assay）の略です。 どのスライドを使用するかは、どのタンパク質を探すか、つまりどの抗体を探すかによって決まります。 エンドミシアル抗体は、筋繊維を取り囲む網状線維の鞘であるエンドミシアルに反応します。 したがって、エンドミシアル抗体を検出するためには、筋肉組織を多く含む組織基質を使用する必要がある。 このアッセイに最もよく使われる基質は、食道の遠位切片である。 これらは非常に薄くスライスされ、スライドに固定されている。

この検査では、反応したスライドを蛍光顕微鏡で観察し、判定を行います。 これには高度な技術と訓練を受けた眼が必要で、必然的にやや主観的な判断になる。 筋繊維を覆っている内膜に緑色の蛍光があるかどうかを見るのです。 検査は、蛍光がまだはっきりと確認できる力価または最終希釈度として報告されます。 ご想像の通り、これは非常に主観的なものです。 標準化された値はなく、終点力価が何であるかは、特定の技術者の判断に委ねられる。 最近（1998年）、抗エンドミシアル抗体の標的となるエンドミシアル抗原が、組織トランスグルタミナーゼ（tTG）として知られるタンパク質架橋酵素であることが明らかにされた。 これにより、従来の主観的な免疫蛍光法に代わる、信頼性が高く客観的な、tTGを組み込んだ抗原特異的ELISAアッセイの作製が可能となった。 臨床試験において、エンドミシアルIFAアッセイとの相関はほぼ100％であることが示されています。 この検査は、専門家の間で非常に高い評価を得ている検査です。 抗グリアジン抗体検査と同様にELISA法であるため、IFAのような解釈の自由度がありません。 これがこの新しい検査の最大の利点です。 この検査や他のELISAでは、溶液に吸収された特定の波長の光の量を計算する装置で反応を測定し、結果を数値でプリントアウトします。 判断材料がないため、人為的なミスで結果が歪むことはない。 ELISAプレートは、何を検査するかにかかわらず、検査する未知試料の他に少なくとも3つの対照血清（時には8つもある）で処理されます。 陰性血清と、検査する抗体のレベルが異なる少なくとも2つの陽性血清があります。 これら3つのコントロールの吸収レベルには特定の要件がある。 すなわち、それぞれ有効な検査であるために装置が見なければならない最小または最大（あるいはその両方）の数値がある。 これらの期待される数値から少しでも変動があれば、それは何かが間違っていたことを示すものであり、検査結果は破棄され、検査が繰り返される。 したがって、技術者が不正確な結果を報告することはあり得ません（サンプルを正しく希釈したと仮定して）。 検査が有効であり、その結果の正確さを信頼できるか、検査が無効であり、結果全体が破棄されるかのどちらかです。 もしELISAプレートの処理中に何らかのエラーが発生した場合、対照血清の数値が範囲外になり、検査結果全体が捨てられることになります。

要するに、tTG ELISAはエンドミシアルIFAが測定しているものと同じものを、より感度と特異性が高く解釈に左右されない手法で測定しているということです。 IgAクラスのレティキュリン抗体は、セリアック病と疱疹状皮膚炎にのみ認められます。 これらの抗体は、セリアック病患者の約60％、DH患者の約25％に認められます。 この検査は、有用性が限られていることと、より優れた検査法があることから、使われなくなりつつある。 この検査は組織基質で行われるIFAであり、それに付随するすべての問題がある。 これらの血清検査法の開発により、セリアック病の診断が飛躍的に簡便化され、精度も向上した。 ヨーロッパ小児消化器栄養学会（ESPGAN）の当初の診断基準では、

• 最初の腸管生検で陽性、
• 6ヶ月間のグルテンフリー食、
• 2度目の腸管生検で陰性、
• 6ヶ月間のグルテンチャレンジ、
• 3度目の腸管生検で陽性を調べるなど、1年間をかけて厳しい調査が行われています。 改訂されたESPGAN基準では、血清学的検査のうち2項目が陽性で、生検が1回陽性であることが確認される必要がある。

セリアック病財団などの後援で、今年初めにカリフォルニア州マリナ・デル・レイで専門シンポジウムとワークショップが開催され、米国だけでなくヨーロッパからも参加者が集まり、検査結果の報告基準を確立しました。 これにより、検査や診断がさらに改善されるはずです。 この会議の結論として、セリアック病標準化委員会が設立され、結果の報告方法の標準化について調査し、勧告を行うことになりました

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