Minimum Inhibitory Concentration (MIC) および Minimum Bactericidal Concentration (MBC) 試験は、試験物質の効力を、最小発育阻止濃度 (Minimum Inhibitory Concentration.) の観点から定義しています。 1×106（100万）個のチャレンジ微生物が、18時間から20時間の培養（35±2℃）の間に完全に死滅する（最小殺菌濃度：MBC）。

MIC法は、定義された期間にわたって防腐剤の濃度を下げていき、微生物集団の増殖の抑制という観点からその効果を測定する方法です。 効果を発揮するために必要な薬剤の濃度は最小阻害濃度と定義され、通常、完成した剤形に含まれる濃度の数百倍から数千分の1以下である。

Methods For Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests For Bacteria That Grow Aerobically

最小発育阻止濃度（MIC）の測定に用いる標準資料は、最新版の Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria that Grow Aerobically (currently, CLSI Doc.) であり、MICはMethods For Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests that Aerobically (MICは希釈して発育する細菌に対する抗菌薬感受性試験) の略称です。 M7-A9, Clinical Laboratory Standards Institute）または嫌気性菌（CLSI Doc.M11-A8）の最新版を使用する。

MIC & MBC試験の概要

製品は、各チャレンジ微生物の増殖に適した増殖培地、通常はミューラーヒントンブロス（MHB）またはミューラーヒントン寒天（MHA）で1：2に連続希釈し、培地で1：32768までの製品の希釈系列を作成します（BSLI SOP L-2045に準拠します）。 ただし、製品の種類によっては、ここまでの希釈系列を行わない場合もある。 成長培地で連続的に希釈した製品の 2.0 mL のアリコートを含む一連のチューブに、チャレンジ種の 1 x 106 CFU/mL 懸濁液を 1.0 mL 加える。 18～24時間の培養後、チャレンジ微生物/製品/培地懸濁液を含むチューブを検査し、肉眼で判断して微生物の増殖を完全に阻害する製品の最高希釈率（逆に製品の最低濃度）を決定する。 この希釈値（および/または製品濃度値）を最小発育阻止濃度値として記録する。

MBCの測定が必要な場合、最小発育阻止濃度を示す希釈懸濁液、および最小発育阻止濃度の希釈に先立つ2〜3の希釈懸濁液から測定量を固体発育培地のプレートに移し、37E±2Eで24時間インキュベートする。 インキュベーションの後、プレートはチャレンジ微生物の増殖について検査される。 発育が見られない製品の希釈率（および/または製品濃度）は MBC として記録される。 MIC/MBC 試験は、栄養寒天培地での製品の 1：2 連続希釈（固相試験）または栄養ブロス培地での製品の 1：2 連続希釈（懸濁相試験）を用いて行うことができることに留意すること。 スポンサーが寒天希釈法を特に要求しない限り、BSLIはマクロチューブ・ブロス希釈法を用いてMIC試験を実施します。

治験薬で試験する製品

治験薬で試験する製品については、TFMの31444ページに、どの微生物が製品のin vitro試験に使われなければならないかが明確に指定されています。 最小阻害濃度試験では、最終製品、製品の活性本体、製品のビヒクルがそれぞれ、グラム陰性菌12種とグラム陽性菌11種、酵母2種（カンジダ・アルビカンスとカンジダ属、アルビカンスは除く）のATCC株と臨床分離株25種に挑戦しなければならないとTFMは述べている。 これは、TFMで指定されている合計25の細菌と酵母の1,250株を、3つの製品構成のそれぞれに対して試験するという、非常に大規模な試験となります。

近年、FDA はこの過酷な要件からいくらか後退しました。最終製品は 1,250 株に対して試験しなければなりませんが、前述のように、製品の活性主体および製品ビヒクルは、25 種類の細菌/酵母のそれぞれについて 5 つの ATCC 株および臨床的に分離した新鮮な 5 株にチャレンジすればよいのです。 それでも、活性本体とビヒクルの両方について試験しなければならない株は合計250株であり、TFM MIC試験全体では、合計1,750個の最小阻害濃度測定という非常に大規模かつ高価な試験となる。 FDAはまた、TFMで必要とされるいくつかの種のATCC株や臨床分離株の不足に対応するため、いくつかの種の代替（例えば、B. fragilis以外のBacteroidesの種、S. epidermidis, S. hominis, S. haemolyticus, S. saprophyticus以外のコアグラーゼ陰性Staphylococcusの種など）を認めています。 また、一般的にアルコールは1:2希釈を2回行うと抗菌活性が低下するため、FDAはアルコールが唯一の活性成分である製品のMICデータを要求していません。

MIC & MBC Proof of Concept in Marketing Purposes

BSLI は、TFM が IND 登録製品に要求する本格的な最小阻害濃度試験をいくつか実施しましたが、最小阻害濃度試験や時折行われる MBC 試験は、大部分が proof-of-concept とマーケティング目的で実施されています。 この種の試験では、BSLIは一般的に、TFMに記載されている25の種/株のすべてのATCC株とそれぞれの臨床分離株を試験することを顧客に推奨しています（つまり、合計50のチャレンジ株）

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