Abstract

Candida albicansに対して植物由来の油38種類について最小阻害濃度（MIC）と最小殺菌濃度（MFC）を決定した。 標準株1株を含む4株を使用した。 陽性対照として抗真菌剤であるFluconazoleおよびAmphotericin Bを使用した。 本研究で用いた標準菌株（ATCC10231）はFluconazoleに対して高い耐性を有していた。 本菌株の発育を部分的に阻止するためには3000 μg ml-1のFluconazoleが必要であり，完全な阻止は不可能であった。 他のCandida属菌は5 μg ml-1のFluconazoleに感受性を示した。 使用したすべての菌株はAmphotericin Bに感受性であった。試験した38種のオイルのうち，23種は有効で，15種は無効であった。 MFCに基づき，有効なオイルは3つのカテゴリーに分類された。 0.15%以下の濃度で殺菌効果を示す7つのオイルは，最も効果的なクラスに分類された。 0.16-1.5%の濃度でMFCを示すオイルは、中程度の効果であると考えられた。 1.5%以上の濃度を必要とする9つのオイルは、効果が低いと見なされた。 また，Fluconazole耐性株（MTCC 227）は，少なくとも23種の植物油に感受性を示した。 3548>

1 はじめに

Amphotericn BとFluconazoleはヒト病原真菌に対する抗真菌化学療法に使用される重要な薬剤である。 アムホテリシンBは末期患者に対する選択薬として使用されている。 アゾール系薬剤であるフルコナゾールは、さまざまなカンジダ・アルビカンス感染症に広く処方されています。 その有効性は広く認められていますが、これらの薬剤には副作用があることが知られています。 また、Fluconazoleは真菌性を有し、C. albicansの臨床分離株でFluconazole耐性が出現しているとの報告もある。 3548>

植物から抽出されたエキスやオイルなど、多くの天然物質は、様々な病気に対して伝統的に使用されています。 植物製品の中には、真菌や細菌の感染症に有効なものもあります。 ティーツリーオイル、レモングラス油、シトロネラ油、パルマローシャ油などの精油とその成分の一部は、C. albicansのin vitro成長に対してテストされている。

我々は、C. albicansの4分離株に対して38植物油のin vitro効力をテストした。 有効なオイルの最小発育阻止濃度（MIC）および最小殺菌濃度（MFC）を報告した。 2.1 薬品と菌株

Amphotericin B測定用標準菌株ATCC10231（MTCC 227/CA IV）とC. albicansの臨床分離株3株を使用し、標準菌株のMICとMFCは、C. albicansの臨床分離株のMICとMFCは3つのカテゴリーに分類されている。 C. albicansの3つの臨床分離株、すなわちSRTCC I（CA I）、SRTCC II（CA II）、SRTCC III（CA III）は、SRTM University, School of Life Sciences, Nanded（MS）, SRTCC Culture Collection Centerから入手した． India. 標準菌株は、The Institute of Microbial Technology (IMTECH), Chandigarh, Indiaから購入した。

本研究では、38種類の植物オイルを使用した。 一部のオイルはインド・ラクナウの中央薬用芳香植物研究所（CIMAP）から提供され、残りのオイルや抗真菌剤であるアムホテリシンBとフルコナゾールは地元の市場から購入した。

2.2 植菌の調製

本研究で用いたC. albicansの全株をYeast Extract Peptone mediumとSabouraud Dextrose mediumを用いて30℃、24時間振とう培養した。 細胞は遠心分離により採取し，滅菌蒸留水に懸濁した後，直ちに使用した。 2.3 ディスクディフュージョンアッセイによる植物油の抗カンジダ活性のスクリーニング

38種の植物油の抗カンジダ活性を標準ディスクディフュージョンアッセイでテストした。 Sabouraud Dextrose Agarプレートを用意し、上記の方法で調製したCandida株を植菌して5×106 cfu ml-1で播種した。 無菌的に5μlの植物油を5mm濾紙ディスク（Whatman No.1）上にスポットした。 このディスクを播種したプレートの中央に移した。 各濃度について3枚のプレートを使用し、30±2℃でインキュベートした。 2.4 寒天希釈法による植物油の最小阻害濃度（MIC）の測定

植物油の最小阻害濃度（MIC）は寒天希釈法で測定した（23）寒天プレートは、様々な濃度の植物油（すなわち、0.03-3％v/v）を含むYPD寒天を加えて準備した。 オイルの溶解性を高めるためにTween 20 0.5% (v/v)を添加した。 これらのプレートに、上記のように調製したCandida株の植菌体を用いて103 cfuを接種した。 プレートは、各濃度について3枚ずつ保管した。 Tween20を添加し、植物油を添加しないプレートをコントロールとして用いた。 これらのプレートはすべて30±2℃でインキュベートした。 48時間培養後，プレートを観察し，コロニー数を計数した。 2.5 Broth macro dilution methodを用いた植物油の最小殺菌濃度（MFC）の測定

Broth macro dilution assay (NCCLS M27-A, reference method recommended for the antifungal susceptibility testing of yeast) により植物油の最小殺菌濃度（MFC）を測定した． フラスコ内のYPDブロス培地に、様々な濃度（0.03-3% v/v）の植物オイルを調製した。 オイルの溶解性を高めるためにTween 80を最終濃度0.001% (v/v)で添加した。 各フラスコには5×105 cfu ml-1のCandida株を植菌した。 Tween 20を含むが植物油を含まないフラスコをコントロールとした。 各フラスコから5μlの培養液をYPDプレートに接種し、30±2℃、48時間培養した。 3548>

3 結果

3.1 抗カンジダ活性に関する植物油のスクリーニング

試験したC. albicansの分離株は、油に対して異なる感受性を示していることが確認された。 しかし、大部分のオイルは有効であることがわかり、非常に低い濃度でかなりの活性を示した。 テストした38のオイルのうち25は、1-30mmのゾーンオブインヒビション（ZOI）を引き起こした。 17のオイルは10-20 mmのZOIを示した。 また、6種類のオイルは、試験した4種類の菌株すべてに対して1～9 mmのZOIを示した。 ジャスミンとラベンダーはCA IVを除くすべてのCandida属菌の発育を阻止することができなかった。 (表1)。 (13のオイルは5-μlの用量でC. albicans株の成長を阻害することができなかった）。)