De væsentlige krav til enzymassays beskrives, og hyppigt forekommende fejl og faldgruber samt hvordan de kan undgås diskuteres. De vigtigste faktorer, som skal tages i betragtning ved analyse af enzymer, er temperatur, pH, ionstyrke og de rette koncentrationer af de væsentlige komponenter som substrater og enzymer. Det ville være ønskeligt med en standardisering af disse parametre, men de forskellige enzymers forskellige egenskaber forhindrer en ensretning af testbetingelserne. Ikke desto mindre har mange enzymer, især dem fra pattedyr, et pH-optimum nær den fysiologiske pH-værdi på 7,5, og kropstemperaturen på ca. 37 °C kan anvendes som assaytemperatur, selv om 25 °C ofte foretrækkes af eksperimentelle grunde. Men i mange tilfælde dikterer de særlige egenskaber ved det enkelte enzym særlige assaybetingelser, som kan afvige betydeligt fra de anbefalede betingelser.

Dertil kommer, at der ikke kan angives nøjagtige værdier for koncentrationerne af assaykomponenter som substrater og enzymer, medmindre der kan opstilles generelle regler afhængigt af den relative mætningsgrad. Regler for udførelse af enzymassagen, passende håndtering, metodiske aspekter, fremstilling af assayblandinger og blindprøver, valg af assaytidspunktet diskuteres, og der gives forslag til at undgå hyppige og trivielle fejl. Særlige forhold ved mere komplekse enzymassays, herunder reversible reaktioner og koblede test, behandles.

Slutteligt beskrives behandlingen af eksperimentelle data til vurdering af enzymaktiviteten. Proceduren til bestemmelse af den oprindelige enzymhastighed og dens omdannelse til definerede enzymenheder samt forslag til dokumentation af resultaterne præsenteres.