Kuvaillaan entsyymimääritysten olennaiset vaatimukset ja käsitellään usein esiintyviä virheitä ja sudenkuoppia sekä niiden välttämistä. Tärkeimmät tekijät, jotka on otettava huomioon entsyymien määrityksessä, ovat lämpötila, pH, ionivahvuus ja olennaisten komponenttien, kuten substraattien ja entsyymien, oikeat pitoisuudet. Näiden parametrien standardointi olisi toivottavaa, mutta eri entsyymien ominaisuuksien erilaisuus estää määritysolosuhteiden yhtenäistämisen. Monilla entsyymeillä, erityisesti nisäkkäistä peräisin olevilla entsyymeillä, on kuitenkin pH-optimi lähellä fysiologista pH:ta 7,5, ja noin 37 °C:n ruumiinlämpötilaa voidaan käyttää määrityslämpötilana, vaikka kokeellisista syistä usein suositaankin 25 °C:ta. Monissa tapauksissa yksittäisen entsyymin erityispiirteet edellyttävät kuitenkin erityisiä määritysolosuhteita, jotka voivat poiketa huomattavasti suositelluista olosuhteista.

Tarkkoja arvoja määrityskomponenttien, kuten substraattien ja entsyymien, konsentraatioille ei voida myöskään antaa, ellei voida esittää yleisiä sääntöjä, jotka riippuvat suhteellisesta kyllästysasteesta. Keskustellaan entsyymimäärityksen suorittamista koskevista säännöistä, tarkoituksenmukaisesta käsittelystä, menetelmällisistä näkökohdista, määrityssekoitusten ja nollakokeiden valmistuksesta sekä määritysajan valinnasta, ja annetaan ehdotuksia usein toistuvien ja vähäpätöisten virheiden välttämiseksi. Monimutkaisempien entsyymimääritysten erityispiirteitä, mukaan lukien reversiibelit reaktiot ja kytketyt testit, tarkastellaan.

Lopuksi kuvataan kokeellisten tietojen käsittely entsyymiaktiivisuuden arvioimiseksi. Esitetään menettely entsyymin alkunopeuden määrittämiseksi ja sen muuntamiseksi määritellyiksi entsyymiyksiköiksi sekä ehdotuksia tulosten dokumentoimiseksi.