Minimi inhiboiva konsentraatio (MIC) ja minimaalinen bakterisidinen konsentraatio (MBC) määrittelevät testimateriaalin tehon sen pitoisuuden mukaan, jolla se estää bakteerin kasvua (minimaalinen inhiboiva konsentraatio, tai MIC) tai tappaa täydellisesti (bakteerien tappava vähimmäiskonsentraatio tai MBC) 1 x 106 (miljoona) haastemikro-organismia 18-20 tunnin inkuboidun (35 ± 2 °C) altistuksen aikana.
MIC-menetelmällä mitataan antiseptisen aineen pienenevien pitoisuuksien vaikutusta määritellyn ajanjakson aikana mikrobipopulaation kasvun estämisenä. Vaikutuksen aikaansaamiseksi tarvittava lääkeainepitoisuus määritellään pienimmäksi inhiboivaksi pitoisuudeksi, ja se on yleensä useita satoja tai tuhansia kertoja pienempi kuin valmiissa lääkemuodossa esiintyvä pitoisuus.
Methods For Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests For Bacteria That Grow Aerobically
Aerobisesti kasvavien bakteerien mikrobilääkeherkkyystestien laimennusmenetelmät
Vakiomuotoinen viitetieto, jota käytetään perustana minimaalisen inhibitorisen konsentraation (MIC) määrityksen tekemisessä, on uusin versio asiakirjasta Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria that Grow Aerobically (tällä hetkellä CLSI Doc. M7-A9, Clinical Laboratory Standards Institute ) tai anaerobisesti (CLSI Doc. M11-A8).
MIC & MBC-testin yleiskatsaus
Tuote laimennetaan sarjaan 1:2 kasvualustassa, joka soveltuu tukemaan kunkin haastemikro-organismin kasvua, tavallisesti Mueller-Hinton-liemessä (MHB) tai Mueller-Hinton-agarissa (MHA), jotta saadaan aikaan laimennossarja tuotteesta väliaineessa 1:32 768:aan asti (BSLI:n SOP-lomakkeen L-2045 mukaan). Tuotetyypistä riippuen laimennossarjaa ei kuitenkaan välttämättä tehdä niin pitkälle. Sarjan putkiin, joista kukin sisältää 2,0 ml:n annoksen kasvualustaan sarjaan laimennettua tuotetta, lisätään nyt 1,0 ml 1 x 106 CFU/ml:n suspensiota haastettavalla lajilla. 18-24 tunnin inkuboidun altistuksen jälkeen haastemikro-organismi-/tuote-/väliaine-suspensiota sisältävät putket tutkitaan, jotta voidaan määrittää tuotteen suurin laimennos (ja päinvastoin tuotteen pienin konsentraatio), joka estää täysin mikro-organismin kasvun paljain silmin arvioituna. Tämä laimennusarvo (ja/tai tuotteen pitoisuusarvo) kirjataan pienimmäksi inhiboivaksi pitoisuudeksi.
Jos MBC-määritys halutaan tehdä, mitatut määrät siirretään minimi-inhibitiokonsentraatiota edustavasta laimennossuspensiosta ja minimi-inhibitiokonsentraatiolaimennosta edeltävistä kahdesta tai kolmesta laimennossuspension laimennossuspensiosta kiinteää kasvualustaa sisältäville lautasille, joita inkuboidaan sen jälkeen vuorokauden ajan lämpötilassa 37 E ± 2 E. Inkuboinnin jälkeen levyt tutkitaan haastemikro-organismin kasvun varalta. Se tuotteen laimennos (ja/tai tuotteen pitoisuus), joka ei aiheuta kasvua, kirjataan MBC:ksi. Huomaa, että MIC/MBC-testausmenettelyt voidaan suorittaa käyttämällä tuotteen 1:2 sarjalaimennoksia ravintoagarialustassa (kiinteän faasin testaus) tai käyttämällä tuotteen 1:2 sarjalaimennoksia ravintoaineliemialustassa (suspensiovaiheen testaus). Ellei toimeksiantaja nimenomaisesti vaadi agar-laimennusmenetelmää, BSLI tekee MIC-testauksen makroputkiliemi-laimennusmenetelmällä, koska se on paljon vähemmän materiaali- ja aikaavievää.
Tuotteet, jotka testataan uuden lääketutkimuksen yhteydessä
Tuotteille, jotka on testattava IND-tutkimuksen yhteydessä, FDA määrittelee selvästi TFM:n sivulla 31444, mitä mikro-organismeja on käytettävä tuotteiden in vitro-haastamiseen. TFM:ssä todetaan, että minimi-inhibitiokonsentraatiotutkimusta varten valmis tuote, tuotteen vaikuttava pääaine ja tuotteen kantaja-aine on kukin haastettava 25 ATCC-kannalla ja 25 tuoreella kliinisesti eristetyllä kliinisellä kannalla kustakin 12:sta gramnegatiivisesta ja 11:stä grampositiivisesta bakteerilajista sekä kahdesta hiivasienilajiryhmästä (Candida albicans ja Candida spp., ei albicans). Kyseessä on siis hyvin laaja tutkimus, jossa testataan 1 250 bakteeri- ja hiivakantaa yhteensä 25:stä TFM:ssä määritellystä bakteerista ja hiivasta kullakin kolmesta tuotekokoonpanosta.
Viime vuosina FDA on lieventänyt jonkin verran tätä raskasta vaatimusta – vaikka lopputuote on testattava 1250 kannalla, kuten sanottu, tuotteen aktiivinen pääaine ja tuotteen kantaja-aine on testattava vain viidellä ATCC-kannalla ja viidellä tuoreella kliinisesti eristetyllä kannalla kustakin 25:stä bakteeri- ja hiivalajista. Tästä huolimatta sekä tehoaineelle että apuaineelle on testattava yhteensä 250 kantaa, ja koko TFM MIC-tutkimus on melko massiivinen ja kallis – yhteensä 1750 yksittäistä minimi-inhibitoriokonsentraation määritystä. FDA sallii myös joitakin lajikorvauksia (esim. muut Bacteroides-lajit kuin B. fragilis ja muut koagulaasinegatiiviset Staphylococcus-lajit kuin S. epidermidis, S. hominis, S. haemolyticus ja S. saprophyticus), jotta voidaan ottaa huomioon ATCC-kantojen ja/tai kliinisten isolaattien vähäisyys joistakin TFM:ssä vaadituista lajeista. Koska alkoholit eivät yleensä ole antimikrobisesti aktiivisia noin kahden 1:2-laimennoksen jälkeen, FDA ei vaadi MIC-tietoja tuotteista, joissa alkoholi on ainoa aktiivinen komponentti.
MIC & MBC Proof of Concept markkinointitarkoituksiin
Vaikka BSLI on suorittanut useita täysimittaisia TFM:n IND-rekisteröityjä tuotteita varten edellyttämiä minimi-inhibitiopitoisuustutkimuksia, suurin osa minimi-inhibitiopitoisuus- ja satunnaisista MBC-tutkimuksista on suoritettu konseptin osoittamiseksi ja markkinointitarkoituksiin. Tällaisissa tutkimuksissa BSLI suosittelee yleensä asiakkaille, että testataan ATCC-kantoja kaikista 25:stä TFM:ssä luetellusta lajista/kannasta sekä yksi kliininen isolaatti kustakin (eli yhteensä 50 haastekantaa).