Concentração Inibitória Mínima (MIC) e Concentração Bactericida Mínima (MBC) definem a potência de um material de teste em termos da concentração na qual ele irá inibir o crescimento de (Concentração Inibitória Mínima), ou MIC) ou matar completamente (Concentração Bactericida Mínima, ou MBC) 1 x 106 (um milhão) desafiar microorganismos durante um período de 18 a 20 horas de exposição incubada (35 ± 2°C).
O método MIC mede o efeito da diminuição das concentrações de anti-séptico durante um período de tempo definido em termos de inibição do crescimento da população microbiana. A concentração do medicamento necessária para produzir o efeito é definida como a Concentração Inibitória Mínima, e normalmente é várias centenas a milhares de vezes menor do que a concentração encontrada na forma de dosagem final.
Métodos para testes de Susceptibilidade Antimicrobiana de Diluição para Bactérias que Crescem Aerobiamente
A referência padrão usada como base para realizar a determinação da Concentração Mínima Inibitória (MIC) é a versão mais atual dos Métodos para Testes de Susceptibilidade Antimicrobiana de Diluição para Bactérias que Crescem Aerobiamente (atualmente, CLSI Doc. M7-A9, Clinical Laboratory Standards Institute ) ou anaerobiamente (CLSI Doc. M11-A8).
MIC & Visão Geral do Teste MBC
O produto é diluído em série 1:2 num meio de crescimento adequado para suportar o crescimento de cada microrganismo desafiador, normalmente Caldo Mueller-Hinton (MHB) ou Agar Mueller-Hinton (MHA), para produzir uma série de diluição do produto em meio até 1:32,768 (por BSLI SOP L-2045). Entretanto, dependendo do tipo de produto, a série de diluição pode não ser realizada até o momento. Aos tubos da série, cada um contendo uma alíquota de 2,0 mL do produto diluído em série em meio de crescimento agora é adicionado 1,0 mL de uma suspensão de 1 x 106 CFU/mL de uma espécie de desafio. Após as 18 a 24 horas de exposição incubada, os tubos contendo o microrganismo/produto/suspensão média são examinados para determinar a maior diluição do produto (e inversamente, a menor concentração do produto) que inibe completamente o crescimento do microrganismo, conforme determinado a olho nu. Este valor de diluição (e/ou valor de concentração do produto) é registado como o valor da Concentração Mínima Inibitória.
Se uma determinação de MBC é desejada, as quantidades medidas são transferidas da suspensão de diluição que representa a Concentração Inibitória Mínima, e das duas ou três suspensões de diluição que precedem a diluição da Concentração Inibitória Mínima, para placas de meio de crescimento sólido, que são então incubadas por 24 horas a 37E± 2E. Após a incubação, as placas são examinadas para o crescimento do microrganismo desafio. A diluição do produto (e/ou a concentração do produto) que não produz crescimento é registrada como sendo o MBC. Note que os procedimentos de teste MIC/MBC podem ser realizados usando diluições em série 1:2 do produto em meio de ágar nutriente (teste de fase sólida) ou usando diluições em série 1:2 do produto em meio de caldo de nutrientes (teste de fase em suspensão). A menos que o Patrocinador exija especificamente o método de diluição em ágar, a BSLI irá realizar o teste MIC usando o método de diluição em caldo de macrotubo, porque é muito menos material – e mais demorado.
Produtos testados sob uma nova droga de investigação
Para produtos que devem ser testados sob um IND, a FDA especifica claramente na página 31444 do TFM que microorganismos devem ser usados para desafiar os produtos in vitro. Para o estudo da Concentração Mínima Inibitória, a TFM declara que o produto acabado, o produto principal activo e o veículo do produto devem ser desafiados com 25 estirpes de ATCC e 25 estirpes frescas clinicamente isoladas de cada uma das 12 espécies bacterianas Gram-negativas e 11 Gram-positivas e os dois grupos de espécies de leveduras (Candida albicans e Candida spp., não albicans). Este, então, compreende um estudo muito grande que envolve o teste de 1.250 cepas do total de 25 bactérias e leveduras que são especificadas no TFM versus cada uma das três configurações do produto.
Nos últimos anos, a FDA tem recuado um pouco neste requisito oneroso – embora o produto acabado deva ser testado contra as 1.250 estirpes, como foi dito, o produto principal ativo e o veículo do produto só precisam ser desafiados com cinco estirpes de ATCC e cinco estirpes frescas clinicamente isoladas de cada uma das 25 bactérias/espécies de leveduras. Mesmo assim, este total totaliza 250 estirpes que devem ser testadas tanto para o ativo como para o veículo, e o estudo global de TFM MIC é bastante massivo e caro – no total, 1.750 determinações individuais de Concentração Mínima Inibitória. A FDA também permite algumas substituições de espécies (por exemplo, espécies de Bacteroides que não B. fragilis, e espécies de Staphylococcus coagulósico negativo que não S. epidermidis, S. hominis, S. haemolyticus, e S. saprophyticus) para acomodar a escassez de estirpes de ATCC e/ou isolados clínicos de algumas das espécies requeridas pelo TFM. E, reconhecendo que, em geral, os álcoois não são antimicrobialmente ativos após cerca de duas diluições 1:2, a FDA não exige dados da MIC para produtos nos quais o álcool é o único componente ativo.
MIC & MBC Proof of Concept in Marketing Purposes
Embora a BSLI tenha realizado vários dos estudos de Concentração Mínima Inibitória completa exigidos pela TFM para produtos registrados no IND, a maioria dos estudos de Concentração Mínima Inibitória e estudos ocasionais de MBC são realizados para fins de prova de conceito e marketing. Nestes tipos de estudos, a BSLI geralmente recomenda aos clientes que as estirpes de ATCC de todas as 25 espécies/estirpes listadas na TFM, mais um isolado clínico de cada uma, sejam testadas (ou seja, um total de 50 estirpes de desafio).