Introducere: Tratamentul cu Rituximab a îmbunătățit rezultatele pacienților cu LAL cu precursori de celule B (B-ALL) și este limitat în mod convențional la pacienții cu expresie CD20 pe blastele leucemice peste un nivel de 20%. Cu toate acestea, nu se știe dacă această limită arbitrară este semnificativă din punct de vedere biologic sau dacă și pacienții cu niveluri de expresie CD20 mai scăzute beneficiază de tratamentul cu Rituximab. În plus, nivelurile de expresie CD20 ar putea diferi între diferitele compartimente și se pot modifica în timpul tratamentului timpuriu. Prin urmare, în actualul studiu German Multicentric Acute Lymphoblastic Leukemia Acute Lymphoblastic Leukemia (GMALL) 08/2013 German Multicentric 08/2013, Rituximab se aplică tuturor pacienților cu B-ALL BCR-ABL1-negativ în timpul inducției și consolidării timpurii, indiferent de expresia CD20 inițială a blastului. În acest studiu, expresia CD20 pe blastocite la diagnostic și după o prefață de 5 zile cu dexametazonă este caracterizată în detaliu și corelată cu răspunsul MRD după inducția I, inclusiv o doză de Rituximab, pentru a evalua impactul acesteia asupra răspunsului la Rituximab.

Metode: S-a efectuat o cuantificare comparativă a nivelurilor de expresie CD20 la diagnostic (sânge și măduvă osoasă (BM)) și la sfârșitul prefazei (sânge) și a fost corelată cu răspunsul la boala minimă reziduală (MRD) după tratamentul precoce cu Rituximab. Probele au fost supuse procedurilor standardizate EuroFlow de colorare, limpezire și spălare și de setare a instrumentelor (van Dongen et al., 2012) și au fost colorate cu un panou de 3 tuburi, cu 8 culori, care conține markerii CD45, CD20, CD10, CD66c, CD3, CD19, CD71, CD9, CD13+33, CD34, CD22, CD11a și CD38. Au fost măsurate intensitățile medii de fluorescență CD20 (CD20-MFI), precum și procentajele de blastocite B-ALL CD20+ din totalul blastocitelor (%CD20+). MRD a fost cuantificată în ziua 22 după inducția I cu ajutorul PCR cantitativ în timp real a rearanjamentelor genelor imune clonale. Răspunsul MRD după inducție a fost definit ca fiind scăderea MRD la un nivel mai mic de 10-4, iar persistența MRD ca fiind detectarea MRD cuantificabilă ≥10-4.

Rezultate: Au fost evaluate rezultatele FCM dintr-un total de 166 de probe de la 84 de pacienți cu B-ALL. Expresia CD20 a blastocitelor circulante a crescut semnificativ după o prefață de 5 zile în cazul blastocitelor comune/pre-B-ALL (c/pre-B), dar nu și în cazul pro-B-ALL într-o cohortă de 36 de eșantioane de sânge periferic împerecheate (Fig. 1 A-B, n=8 pro-B-ALL, testul t împerecheat al CD20-MFI și %CD20: p=.1016 și p=.1660, Fig. 2 A-B, n=28 c/pre-B-ALL, p=.0029 și p=0.0060). În mod interesant, creșterea expresiei CD20 pe blastele B-ALL a contrastat cu cea de pe celulele B normale mature, unde a avut loc o scădere în probele pro-B-ALL și c/pre-B-ALL în ziua 6 (test t împerecheat: p=.0485 și, respectiv, p<.0001) (Fig.1A, 2A).

În 24 de probe împerecheate de sânge/BM înainte de tratament, procentul de blastocite CD20+ a fost semnificativ mai mare în sânge în c/pre-B-ALL (n=19: test t împerecheat: p=.0009), dar nu și în pro-B-ALL (n=5: test t împerecheat: p=.095) (Fig. 1C, 2C). Nivelurile de semnificație nu au fost atinse în mod constant pentru compararea CD20-MFI. Cu toate acestea, arătăm că la 3/24 (12,5%) de pacienți, procentul de blastocite B-ALL CD20+ în BM nu a atins pragul arbitrar de 20%, în timp ce sângele de diagnosticare corespunzător a atins acest procent.

În cele din urmă, au fost evaluate nivelurile de expresie CD20 din 25 de probe de BM și 30 de probe de sânge înainte de tratament și 38 de probe de sânge după prefaza cu dexametazonă de la 54 de pacienți (în total 93 de probe). În calculele ulterioare, am corelat valorile de răspuns MRD după o doză de Rituximab cu nivelurile de expresie CD20 pe blaste. În detaliu, cea mai mare valoare procentuală măsurată a %CD20 per pacient din grupul de respondenți MRD a fost comparată cu cea mai mare valoare măsurată a %CD20 per pacient din grupul de persistenți MRD. Nivelurile de expresie CD20 au fost semnificativ mai scăzute la 33 de persistenți MRD în comparație cu 21 de respondenți MRD (Fig. 3, p=.0336). Diferența a fost atribuită în principal unei frecvențe ridicate a persistențelor MRD în pro-B-ALL în comparație cu c/pre-B-ALL (persistența MRD în pro-B-ALL 8/9 (89%) în comparație cu 25/45 (56%) în c/pre-B-ALL).

Concluzie: Am măsurat diferențe semnificative ale nivelurilor de expresie CD20 pe blastele leucemice (i) între sângele pre-tratament și BM și (ii) între sângele pre-tratament și sângele după pre-fază la pacienții cu c/pre-B-ALL care contestă criteriile convenționale de eligibilitate pentru tratamentul țintit cu CD20. Cei care au răspuns la MRD au avut tendința de a avea niveluri mai ridicate de expresie a CD20 în comparație cu cei care persistă în MRD. Extinderea cohortei de pacienți este în curs de desfășurare pentru a confirma această observație. În plus, vom analiza impactul a 3 aplicații de rituximab după faza II de inducție.

Ritgen:abbvie: Finanțare pentru cercetare; Roche: Onorarii, finanțare pentru cercetare. Viardot:Gilead Kite: Consultanță, onorarii; Roche: Consultanță, onorarii; Pfizer: Consultanță, onorarii; BMS: Consultanță, onorarii; Amgen: Consultanță. Kneba:Roche: consultanță, onorarii; AbbVie: consultanță, onorarii. Goekbuget:Kite / Gilead: Consultanță; Celgene: Consultanță; Novartis: consultanță, altele: Sprijin pentru călătorii, Finanțare pentru cercetare; Pfizer: Consultanță, Altele: Sprijin pentru deplasări, finanțare pentru cercetare; Amgen: Consultanță, altele: Sprijin pentru călătorii, finanțare pentru cercetare. Brüggemann:Incyte: Consultanță; Amgen: Consultanță, finanțare pentru cercetare, birou de vorbitori; PRMA: consultanță; Affimed: Finanțare pentru cercetare; Regeneron: Finanțare pentru cercetare; Pfizer: Speakers Bureau; Roche: Speakers Bureau.

.