Abstract
-
Tehnicile de reproducere asistată sunt tehnici de reproducere in vitro care sunt utilizate pe scară largă la multe specii, unde au o importanță atât pentru sănătate, cât și economică.
-
În ultimele decenii, au existat mari îmbunătățiri în astfel de tehnici, inclusiv manipularea gameților, crioconservarea, fertilizarea in vitro și producerea de embrioni in vitro; cu toate acestea, eficacitatea acestor tehnici este departe de a fi optimă în comparație cu situația in vivo.
-
Din moment ce maturarea finală a gameților, fertilizarea și clivajul embrionar timpuriu in vivo au loc în oviduct, se propune ca o cunoaștere mai largă a mediului oviductal să contribuie la creșterea eficienței tehnicilor de reproducere asistată prin transpunerea condițiilor naturale în laborator.
Introducere
Fertilizarea la un număr mare de animale are loc într-o regiune specifică a tractului genital feminin numită oviduct (trompa uterină sau trompa lui Fallopie), care se alătură în uter și este situată în apropierea ovarului (figurile 1 și 2). Oviductul este un comportament fibromuscular complex cu mai multe straturi care cuprind mucoasa, stratul muscular și o seroasă conjunctivă. Dimensiunea acestor diferite straturi depinde de regiunea anatomică a oviductului observată. În ampulă, unde are loc fecundarea, a fost observată o mucoasă foarte pliată; cu toate acestea, dimensiunea și numărul de pliuri sunt reduse în regiunea istmului și chiar mai mult la nivelul joncțiunii tubare uterine (figura 2c). Regiunea istmului este frecvent asociată cu stocarea spermatozoizilor înainte de ovulație. Evenimente foarte importante pentru fertilizare au loc în oviduct. De exemplu, mediul oviductal este responsabil de maturarea finală a gameților feminini și masculini, de fertilizare și de dezvoltarea embrionară timpurie. Este important de luat în considerare faptul că embrionii timpurii petrec câteva zile în oviduct înainte de a ajunge în uter, unde are loc implantarea. În consecință, oviductul este un organ dinamic adaptat la diferite situații care sunt reglementate în principal de nivelurile variabile de hormoni din sânge. Înțelegerea secrețiilor oviductale în care sunt plasați temporar gameții și embrionii este în continuă creștere. Cu toate acestea, este relativ redusă, iar mai multe informații privind activitățile biologice ale lichidului oviductal vor fi foarte utile din motive domestice, economice și legate de fertilitate. S-a observat că fertilitatea la animalele domestice este redusă din cauza selecției genetice (de exemplu, la vacile de lapte) (Diskin și Morris, 2008). Din acest motiv, preconizăm că cercetarea componentelor fluidului oviductal va îmbunătăți fertilitatea și eficiența diferitelor tehnici de reproducere asistată (ART) pentru animalele domestice și animalele de companie. Aceste aspecte vor fi abordate mai detaliat în continuare.
Tractul genital femelă bovină. A) Sunt reprezentate uterul (UT), ovarul (OV) și oviductul (OD). B) Mărirea regiunii încercuite din figura 1A, care arată tractul în detaliu, unde pot fi identificate ampulla și joncțiunea tubară uterină.
Tractul genital feminin bovin. A) Sunt reprezentate uterul (UT), ovarul (OV) și oviductul (OD). B) Mărirea regiunii încercuite din figura 1A care arată tractul în detaliu, unde pot fi identificate ampulla și joncțiunea tubară uterină.
Tractul genital feminin la șoareci (A și B) și la șobolani (C). A și B) Sunt prezentate diferite regiuni ale oviductului. Intrarea ovocitelor (săgeată) în oviduct după ovulație are loc în regiunea infundibulumului (If). Se poate observa prezența complexelor cumulus oohorus-oocit în interiorul ampulei (Am). Spermatozoizii prezenți în uter trebuie să traverseze joncțiunea uterino-tubulară (UTJ) și să ajungă în ampulă pentru a fertiliza ovocitele. C) O secțiune de parafină colorată cu lectina de aglutinină din germeni de grâu (WGA). Se observă diferențe histologice și histochimice în diferite regiuni ale oviductului. Figurile 2A și 2B sunt republicate și modificate cu permisiunea Societății Americane pentru Investigații Clinice din Fertilizare: A Sperm’s Journey to and Interaction with the Oocyte de Masahito Ikawa, Naokazu Inoue, Adam M. Benham și Masaru Okabe. Permisiune transmisă prin intermediul Copyright Clearance Center, Inc. Vol. 120 (4): 984-994, 2010 publicat în Journal of Clinical Investigation.
Tractul genital feminin la șoareci (A și B) și la șobolani (C). A și B) Sunt prezentate diferite regiuni ale oviductului. Intrarea ovocitelor (săgeată) în oviduct după ovulație are loc în regiunea infundibulumului (If). Se poate observa prezența complexelor cumulus oohorus-oocit în interiorul ampulei (Am). Spermatozoizii prezenți în uter trebuie să traverseze joncțiunea uterino-tubulară (UTJ) și să ajungă în ampulă pentru a fertiliza ovocitele. C) O secțiune de parafină colorată cu lectina de aglutinină din germeni de grâu (WGA). Se observă diferențe histologice și histochimice în diferite regiuni ale oviductului. Figurile 2A și 2B sunt republicate și modificate cu permisiunea Societății Americane pentru Investigații Clinice din Fertilizare: A Sperm’s Journey to and Interaction with the Oocyte de Masahito Ikawa, Naokazu Inoue, Adam M. Benham și Masaru Okabe. Permisiune transmisă prin intermediul Copyright Clearance Center, Inc. Vol. 120 (4): 984-994, 2010 publicat în Journal of Clinical Investigation.
Interacțiuni între oviduct și spermatozoizi
Fertilizarea are loc într-o regiune specializată a oviductului numită ampulă, unde spermatozoizii pătrund în învelișul extracelular al ovulului (celulele cumulus și zona pellucida). Sosirea ovocitelor și a spermatozoizilor în oviduct nu este întotdeauna un eveniment sincronizat, deoarece la unele specii (de exemplu, câinele), ovocitele sunt eliberate cu două sau trei zile înainte de fertilizare, în timp ce la altele (de exemplu, liliecii), spermatozoizii sunt prezenți în tractul genital feminin cu până la șase luni înainte de ovulație (Holt, 2011). Prin urmare, se presupune că mediul oviductal oferă un mediu bun pentru supraviețuirea și maturarea gameților.
Oviductul este capabil să îndeplinească diferite funcții deoarece are diferite regiuni anatomice (Figura 2) și un fluid oviductal complex care este dinamic datorită schimbărilor produse în timpul ciclului oestrous (Yañiz et al., 2006; Leese et al., 2008; Avilés et al., 2010). Această complexitate a început să fie înțeleasă recent datorită dezvoltării unor instrumente analitice puternice. De exemplu, mai multe sute de proteine (spoturi) pot fi identificate atunci când lichidul oviductal este analizat biochimic (figura 3). Utilizarea electroforezei bidimensionale oferă informații calitative și cantitative despre diferitele proteine (numărul și volumul spoturilor) prezente în lichidul oviductal. Acest tip de analiză ar detecta modificări subtile (de exemplu, fosforilarea) în proteine în funcție de ciclul estral sau datorită prezenței gameților. Printre rezultatele surprinzătoare se numără modificările care au loc în transcriptomul oviductal ca urmare a prezenței gameților sau a embrionilor (Fazeli et al., 2004; Georgiou et al., 2007; Almiñana et al., 2012). Modificări și mai specifice au fost observate în funcție de stadiul de dezvoltare a embrionului (embrion cu patru celule sau blastocist), producând o downreglementare a genelor legate de imunitate care afectează uterul chiar înainte de sosirea embrionului în acest organ (Almiñana et al., 2012). Mai mult, modificările au fost detectate și în prezența spermatozoizilor cu un cromozom X sau Y (Almiñana et al., 2014). Expresia genelor (transcriptomul) și a proteinelor (proteomul) în oviduct este împărtășită de mai multe specii, dar nu sunt identice, ceea ce sugerează că unele funcții sunt conservate; cu toate acestea, se pare că alte proprietăți specifice sunt unice pentru fiecare specie (Bauersachs et al., 2003, 2004; Tone et al., 2008; Mondéjar et al., 2012). Acest lucru ar trebui luat în considerare pentru dezvoltarea de diluanți și medii de cultură specifice pentru diferite specii.
Analiza proteinelor din lichidul oviductal porcin din faza preovulatorie a ciclului. Proba (300 μg) a fost separată prin electroforeză pe gel bidimensional și colorată cu albastru de coomassie. Proteinele au fost mai întâi separate în funcție de punctul lor izoelectric (pI) prin focalizare izoelectrică (sens orizontal) utilizând o bandă Bio-Rad cu un gradient de pH între 3 și 10. Ulterior, proteinele sunt separate în funcție de greutatea lor moleculară (sens vertical) folosind un gel SDS-PAGE 12% (18 x 20 cm).
Analiza proteinelor din lichidul oviductal porcin din faza preovulatorie a ciclului. Proba (300 μg) a fost separată prin electroforeză pe gel bidimensional și colorată cu albastru de coomassie. Proteinele au fost mai întâi separate în funcție de punctul lor izoelectric (pI) prin focalizare izoelectrică (sens orizontal) utilizând o bandă Bio-Rad cu un gradient de pH între 3 și 10. Ulterior, proteinele sunt separate în funcție de greutatea lor moleculară (sens vertical) folosind un gel SDS-PAGE 12% (18 x 20 cm).
Protecția și supraviețuirea gameților
S-a raportat că prezența lichidului oviductal are un efect pozitiv asupra viabilității spermatozoizilor (Killian, 2011) și că oviductul furnizează nutrienții necesari pentru supraviețuirea ovocitelor și enzime cu efect antioxidant în lichidul oviductal (Leese et al, 2008; Avilés et al., 2010). Aceste enzime sunt deosebit de relevante pentru spermatozoizi, deoarece aceștia sunt ușor de deteriorat atunci când sunt expuși la specii reactive de oxigen (ROS) care modifică membrana plasmatică (peroxidarea proteinelor și a lipidelor), ceea ce poate duce la ruperea ADN-ului (Aitken și Luliis, 2010). În plus, spermatozoizii din tractul genital feminin sunt considerați drept celule străine, ceea ce afectează supraviețuirea spermatozoizilor din cauza supravegherii imunologice (Kawano et al., 2014). Modul în care este reglementat acest proces rămâne să fie clarificat, dar ceea ce este indubitabil este că mediul oviductal protejează spermatozoizii. Dovezi în sprijinul acestui lucru pot fi găsite în faptul că spermatozoizii pot supraviețui în oviduct de la una sau două zile în cazul vacilor sau scroafelor până la 6 luni în cazul liliacului (Holt, 2011).
Maturarea ovocitelor în oviduct
S-a raportat că durata de viață a ovocitelor în oviduct este de aproximativ 24 de ore la om, ceea ce este similar pentru majoritatea speciilor analizate până în prezent. Cu toate acestea, câinele este special, deoarece ovocitele eliberate de ovar în momentul ovulației sunt imature și trebuie să rămână între 2 și 3 d în oviduct pentru a se maturiza înainte de fertilizare (Tsutsui et al., 2009). La unele specii, eficiența fertilizării in vitro (FIV) este încă scăzută, în principal din cauza standardizării inadecvate a tehnicilor ART (Mondéjar et al., 2012). Cu toate acestea, două ipoteze legate de maturarea ovocitelor în oviduct pot fi luate în considerare pentru a explica diferențele dintre eficiența fertilizării in vivo și in vitro: (i) Evenimentele care au loc în oviduct nu sunt fundamentale, dar, deoarece nu au loc în timpul procedurilor in vitro, doar ovocitele de cea mai bună calitate supraviețuiesc. Acesta ar fi motivul pentru care procentul redus de succes în cadrul ART în comparație cu evenimentele in vivo. (ii) Ovocitele utilizate pentru procedurile in vitro sunt de o calitate mai slabă decât cele ovulate și fertilizate fiziologic în oviduct, rezultând embrioni cu modificări ale unor trăsături nevitale, dar importante pentru sănătatea lor la vârsta adultă, cum ar fi mărcile epigenetice (El Hajj și Haaf, 2013). Mai multe proteine din fluidul oviductal se pot lega de învelișul extracelular al ovocitelor numit zona pellucida (ZP), modificând atât compoziția proteică, cât și cea glucidică a acestuia. Astfel, s-a demonstrat că glicoproteina specifică oviductului (OVGP1), osteopontina, prostaglandina D-sintetaza de tip lipocalină și lactoferrina se asociază cu ZP de diferite specii (Goncalves, et al., 2008). OVGP1 este cea mai studiată proteină asociată cu ZP și a fost demonstrat rolul său în întărirea ZP înainte de fertilizare care reduce polispermia la porc (Coy et al., 2008).
Diverse mecanisme care participă la legarea spermatozoizilor de ZP și la procesul general de fertilizare (care reglează posibilitatea de polispermie) sunt modulate de oviduct. În cazul întăririi ZP înainte de fertilizare, o serie de experimente cu ovocite de la nouă specii și fluide oviductale de la cinci specii au indicat faptul că scurta incubare a ovocitelor ovariene cu fluid oviductal produce o schimbare clară a rezistenței ZP la digestia enzimatică (Mondéjar et al., 2013). Cu toate acestea, rezultatele obținute nu au fost identice, indicând un grad de specificitate care s-ar putea datora (i) compozițiilor proteice diferite ale fluidului oviductal sau chiar unei secvențe proteice diferite codificate de gena ortologă, așa cum s-a demonstrat pentru OVGP1 (Avilés et al., 2010) sau (ii) unei compoziții diferite a ZP (proteine și carbohidrați; Stetson et al., 2012). Unele dintre diferențele dintre specii ar putea rezulta chiar din absența proteinelor, așa cum este cazul OVGP1 la cal și la șobolan. Mai mult, la cal, sperma nu este capabilă să fertilizeze ovocitul in vitro; cu toate acestea, atunci când ovocitul este incubat cu lichid oviductal porcin sau cu proteina oviductală DMBT1, rata de fertilizare crește foarte mult (Ambruosi et al, 2013), demonstrând relevanța oviductului la această specie.
Spermatozoizii în oviduct
Spermatozoizii aderă la epiteliul oviductal în regiunea istmului. Această legare este responsabilă de formarea unui rezervor de spermatozoizi care așteaptă momentul ovulației. O astfel de legare este importantă nu numai pentru menținerea viabilității spermatozoizilor, ci și pentru a bloca capacitarea prematură, care ar compromite sau chiar ar împiedica fecundarea. Eliberarea spermatozoizilor din acest rezervor pare să fie mediată de diferiți factori, inclusiv semnale mediate de complexul cumulus-oocit (COC), componente oviductale care modifică legarea spermatozoizilor și, de asemenea, modificări ale nivelurilor de progesteron și estradiol și hiperactivarea motilității spermatozoizilor (Suarez, 2006, 2008; Kölle et al, 2009; Talevi și Gualtieri, 2010; Coy et al., 2012).
Spermatozoizii eliberați în momentul ejaculării nu sunt capabili să fertilizeze ovocitele și trebuie să locuiască în tractul reproducător feminin înainte de a dobândi capacitatea de a finaliza procesul de fertilizare. Diferitele modificări biologice prin care trec spermatozoizii în tractul genital feminin sunt cunoscute sub numele de capacitare, un proces descoperit independent de Austin (1951) și Chang (1951) folosind iepurele ca model animal. Mecanismul molecular detaliat implicat în acest proces nu este încă cunoscut, în principal din cauza dificultății de a stabili ce se întâmplă cu adevărat în interiorul oviductului. Modificările observate la spermatozoizi pot fi produse prin redistribuirea sau eliberarea de proteine, deși pot fi implicați și alți factori (Yanagimachi, 1994; Florman și Ducibella, 2006). S-a raportat că spermatozoizii sunt modificați prin legarea diferitelor proteine oviductale (osteopontin și OVGP1), care, în general, cresc viabilitatea, motilitatea și capacitarea spermatozoizilor la mai multe specii (Kan et al., 2006; Killian, 2011). Astfel, OVGP1 nu numai că este capabilă să se lege de ZP și de spermatozoizi, dar este, de asemenea, capabilă să crească fosforilarea proteinelor în spermatozoizi, care este legată de capacitarea spermatozoizilor (Kan et al., 2006). Alte mecanisme implicate în capacitarea spermatozoizilor de bovine și porcine sunt legate de prezența diferitelor glicozide în lichidul oviductal (Carrasco et al., 2008) și în epiteliile oviductale (Ma et al., 2012). În plus, eliberarea de sialidază din membrana plasmatică a spermatozoizilor în timpul capacitatului a fost descrisă recent (Ma et al., 2012). Aceste glicozide pot modula legarea spermatozoizilor la epiteliul oviductal și, în consecință, eliberarea lor din rezervorul de spermă. Foarte recent, a fost descrisă pentru prima dată existența unui nou mecanism responsabil pentru modificările specifice mediate de vezicule mici (exosomi) în timpul tranzitului spermatozoizilor prin oviduct (Al-Dossary et al., 2013). Studii recente care au utilizat șoareci modificați genetic au furnizat dovezi puternice ale relevanței tractului genital feminin în fertilitatea spermatozoizilor (Kawano et al., 2010; Turunen et al., 2012). Astfel de șoareci modificați sunt subfertili sau nu sunt capabili să fertilizeze ovocitele prin tehnici de fertilizare in vitro. Cu toate acestea, acești șoareci masculi modificați genetic sunt fertili in vivo. S-a constatat că spermatozoizii lor sunt capabili să fertilizeze ovocitele folosind tehnici de FIV atunci când sunt incubați cu secreții uterine, un proces care poate fi mediat de exosomi, așa cum s-a descris mai sus (Kawano et al., 2010). Secrețiile tractului genital feminin ar putea fi utilizate pentru a îmbunătăți capacitatea de fertilizare a spermatozoizilor in vitro în cazul bărbaților cu o valoare genetică importantă, dar cu o fertilitate altfel slabă.
Transportul gametului și al embrionului în oviduct
Gameții și embrionii trebuie să se afle în locul potrivit la momentul potrivit; în consecință, oviductul are o contribuție majoră la acest proces. Spermatozoizii trebuie să ajungă în amputația oviductală pentru a fertiliza ovocitele. După fertilizare, zigotul și embrionii timpurii trebuie să fie transportați în uter pentru a permite implantarea blastocistului în endometru (mucoasa uterină). Cu toate acestea, mecanismul implicat nu este atât de simplu pe cât se așteaptă.
Transportul ovocitelor și al embrionilor
Ovocitele și embrionii sunt imobile. Ovocitele sunt înconjurate de un număr mare de celule (celule cumulus) în momentul ovulației, când formează o structură numită cumulus oophorus, care este captată de infundibulum (figura 2). Ele nu au capacitatea de a se deplasa, așa cum o fac spermatozoizii, și trebuie să fie transportate în mod pasiv. S-a raportat că ușoare modificări ale nivelului de expansiune a cumulusului afectează aderența inițială a complexelor cumulus-ovocite la epiteliul din infundibulum, împiedicând transportul lor ulterior (Suarez, 2006). Două componente esențiale sunt implicate în transportul ovocitelor către locul de fertilizare: contracțiile coordonate ale celulelor musculare netede (miosalpinx sau stratul muscular) de-a lungul oviductului și bătăile ciliare ale celulelor epiteliale (figura 4). Dacă contracțiile oviductale sunt alterate, ovocitele nu vor ajunge la locul de fertilizare la șoareci (Dixon et al., 2009). Embrionii și ovocitele sunt transportate cu viteză diferită în oviductul iepei și al șobolanului (Suarez, 2006). Astfel, prostaglandina E2 produsă de embrioni este implicată în acest proces. Recent, s-a raportat că embrionii induc o modificare a expresiei genelor oviductale și, în consecință, își pot modula propriul mediu (Almiñana et al., 2012).
Celule epiteliale ale oviductului bovin observate prin microscopie electronică de scanare. Pot fi identificate două tipuri diferite de celule – celulele ciliate cu numeroși cili (Ci) și celulele secretorii (SC).
Cele celule epiteliale ale oviductului bovin observate prin microscopie electronică de baleiaj. Pot fi identificate două tipuri diferite de celule – celulele ciliate cu numeroși cili (Ci) și celulele secretorii (SC).
Transportul spermatozoizilor
În ciuda numărului mare de spermatozoizi eliberați în timpul ejaculării (peste 40 de milioane și 37.5 miliarde pentru om și, respectiv, mistreț), doar câteva spermatozoizi reușesc să ajungă în ampulă (100-1000 și, respectiv, 5000 pentru om și mistreț) și un număr mare de spermatozoizi sunt aruncați (Harper, 1994; Hunter, 2012a; Suarez, 2006). Prezența unui număr redus de spermatozoizi la locul de fertilizare înseamnă că raportul ovocit:spermatozoizi este apropiat de 1:1. Acest lucru este important, deoarece un număr mare de spermatozoizi ar crește polispermia, care este letală pentru embrionii mamiferelor (Hunter, 2012a). Mecanismul prin care spermatozoizii găsesc ovocitele este încă necunoscut. Studii recente sugerează că spermatozoizii ajung la locul de fertilizare datorită unui mecanism de chemotaxie și/sau termotaxie (Eisenbach și Giojalas, 2006; Hunter, 2012b), procese care ar fi responsabile de direcționarea spermatozoizilor către partea superioară a oviductului. S-a sugerat că este implicat un gradient chimic mediat de progesteronul produs de celulele cumulus (Eisenbach și Giojalas, 2006; Coy et al., 2012; Guidobaldi et al., 2012). Șoarecii care produc ovocite oviductale denudate nu sunt fecundate in vivo; cu toate acestea, aceste ovocite pot fi fecundate in vitro, sugerând relevanța acestei structuri pentru situația in vivo (Zhuo et al., 2001). Aceste studii indică relevanța ooforului cumulus și ne reamintesc faptul că datele obținute cu ajutorul modelelor in vitro necesită o interpretare atentă; în plus, acestea evidențiază necesitatea unor modele in vitro mai precise, care să imite mai bine mediul in vivo. Până în prezent, progresele pe acest front au fost lente. Ar fi de așteptat ca intrarea spermatozoizilor în oviduct să fie un proces relativ simplu, care să depindă de contracția musculară a uterului și de motilitatea spermatozoizilor dirijată de chemo- sau termotaxie. Cu toate acestea, s-a demonstrat că spermatozoizii nu sunt capabili să traverseze joncțiunea tubară uterină atunci când una dintre proteinele spermatozoizilor (de exemplu, ADAM3) este modificată (Okabe, 2013). Rămâne de descoperit ce interacțiune moleculară specifică există între spermatozoizi și oviduct care permite intrarea spermatozoizilor în oviduct.
Efectul mediului oviductal asupra dezvoltării embrionare
Faptul că embrionii pot fi obținuți in vitro și că donatorii care nu au proprii embrioni în uter pot stabili o sarcină după transferul de embrioni subminează rolul oviductului. Cu toate acestea, s-a demonstrat la diferite specii că calitatea blastocistului obținut după ce embrionii au fost cultivați în oviduct este mai bună în comparație cu cea a embrionilor produși in vitro, cel puțin în ceea ce privește morfologia, expresia genică, criotoleranța și rata de sarcină după transfer (Rizos et al., 2007; 2010a; Mondéjar et al., 2012; Van Soom et al., 2014). Acest lucru demonstrează că oviductul nu este un organ pentru simplul transport al zigotului/embrionului timpuriu prin uter, ci că există o comunicare între ele. Primele etape de dezvoltare a embrionului au loc în oviduct, unde embrionul petrece în jur de 4 până la 5 d, independent de diferența mare în ceea ce privește lungimea oviductului observată la mai multe specii (a se compara figurile 1 și 2b; Suarez, 2006; Wang și Dey, 2006). În această perioadă, au loc mai multe evenimente majore, primul fiind procesul de clivaj și trecerea de la genomul matern la genomul embrionar. Orice modificare a mediului de cultură care afectează oricare dintre aceste procese ar putea avea un efect profund asupra calității blastocistului (Lonergan et al., 2003a). Recent, s-a raportat că schimbarea condițiilor de cultură de la in vivo la in vitro, sau invers, într-un punct specific al dezvoltării embrionare timpurii, fie înainte sau după activarea genomului embrionar, influențează în mod critic modelele de expresie genetică ale blastocisturilor rezultate (Gad et al., 2012). Mai mult, s-a observat inițial că divizarea embrionară (diviziunile celulare) este blocată (stadiul de două celule la șoareci și stadiul de opt celule la vaci) atunci când condițiile de cultură in vitro nu sunt optime. La șoareci, blocarea dezvoltării embrionare a fost depășită după adăugarea proteinei oviductale OVGP1 în mediul de cultură (Yong et al., 2002). Mai multe studii experimentale au demonstrat că oviductul diferitelor specii are proprietăți biologice similare, ceea ce este în concordanță cu profile transcriptomice și proteomice similare (Mondéjar et al., 2012). Astfel, oviductul unei anumite specii poate fi utilizat pentru a îmbunătăți dezvoltarea embrionară a unei specii diferite, într-un proces cunoscut sub numele de testare hetorologică. Oviductul bovin, de șoarece, de iepure și de oaie a fost utilizat pentru cultivarea embrionilor în oviducturi heterologe sau omologe in situ pentru a produce embrioni de o calitate mai bună de la multe specii (Rizos et al., 2002a, 2010a; Lazzari et al., 2010). Orice comunicare între oviduct și embrion este fin reglementată; de exemplu, la bovine, doar un singur embrion se dezvoltă in vivo, în timp ce, in vitro, cultivarea embrionilor în grupuri este necesară pentru o rată mai mare de dezvoltare a blastocistului (Goovaerts et al., 2009).
Ovarul de vacă cu infundibulul oviductului. Infundibulum-ul este acoperit cu cili care bat spre deschiderea oviductului. Acesta direcționează ovocitul ovulat în oviduct.
Ovarul de vacă cu infundibulul oviductului. Infundibulul este acoperit cu cili care bat spre deschiderea oviductului. Acesta direcționează ovocitul ovulat în oviduct.
Perspective viitoare: Știința fundamentală va îmbunătăți eficiența tehnicilor de reproducere asistată
Se poate presupune că eficacitatea ART se va îmbunătăți la fel de repede ca și cunoștințele noastre despre procesul in vivo. Cunoștințele noastre despre mediile in vitro se bazează în mare parte pe încercări și erori, mai degrabă decât pe o cunoaștere precisă a nevoilor gameților și embrionilor; prin urmare, ART va oferi în mod inevitabil un mediu suboptimal, ceea ce va duce la un repertoriu discordant de semnale biochimice. Cunoașterea componentelor secretorii ale oviductului va oferi informații utile pentru îmbunătățirea diferitelor tehnici de ART cu consecințe economice și de sănătate importante. Astfel, unele dintre protocoalele de conservare a speciilor care acoperă infertilitatea și conservarea genetică vor fi în mod inevitabil îmbunătățite. Dezvoltarea ART a avut loc în grade diferite la diferite specii, demonstrând că procesul de fertilizare este similar, dar nu identic la toate speciile (Mondéjar et al., 2012; Van Soom et al., 2014), astfel încât se recomandă cercetări viitoare în diferite modele animale. Oviductul este extrem de important pentru ovocite, spermatozoizi și embrioni. In vivo, oviductul contribuie la protecția și maturizarea spermatozoizilor. Cunoașterea modului în care este reglementat acest proces va permite ca aceste constatări să fie extrapolate la îmbunătățirea diferiților diluanți de spermă (cunoscuți sub numele de extenderi) care îmbunătățesc vitalitatea și calitatea spermatozoizilor în timpul depozitării spermei, al crioconservării, al inseminării artificiale, al fertilizării in vitro și al sortării pe sexe. Studii anterioare au demonstrat că adaosul de proteine oviductale la diluanții de spermă îmbunătățește capacitatea de fertilizare și supraviețuirea spermatozoizilor sortați în funcție de sex (Klinc și Rath, 2007; Lloyd et al., 2012). Studiul detaliat al biologiei oviductale va contribui la înțelegerea noastră a maturării ovocitelor oviductale, oferind noi instrumente pentru a îmbunătăți supraviețuirea și competența de meioză, controlul polispermiei și penetrarea spermatozoizilor. În cele din urmă, furnizăm dovezi ale relevanței oviductului pentru dezvoltarea unor medii de cultură mai bune pentru dezvoltarea și supraviețuirea embrionilor după crioprezervare. În concluzie, decenii de studii științifice de bază legate de fiziologia oviductală au furnizat informații importante despre fertilizarea in vivo și au ajutat la atingerea unor obiective pe care puțini și le-ar fi putut imagina. Suntem convinși că, în viitorul apropiat, noile cunoștințe generate cu privire la efectul produs de oviduct în gameți și embrioni vor îmbunătăți eficiența ART, cu beneficii evidente pentru sănătate și economie.
Ne cerem scuze că nu am inclus toate acele articole relevante care au contribuit la dezvoltarea acestui domeniu din cauza limitărilor de spațiu. Dorim să le mulțumim tuturor membrilor laboratoarelor noastre pentru contribuțiile lor științifice din acești ani. Autorii mulțumesc Dr. Alejandro Torrecillas și Omar Salvador Acuña pentru pregătirea figurilor 3 și, respectiv, 4. Ministerul spaniol al Economiei și Competitivității și Comisia Europeană (FEDER/ERDF) au sprijinit cercetările lui D. Rizos (AGL2012-37510), P. Coy (AGL2012-40180-C03-01) și M. Avilés (AGL2012-40180-C03-02). M. Avilés beneficiază, de asemenea, de sprijinul Fundación Séneca de la Región de Murcia (0452/GERM/06).
Manuel Avilés este profesor asociat în cadrul Departamentului de Biologie Celulară și Histologie al Facultății de Medicină și Asistență Medicală de la Universitatea din Murcia (Spania). Și-a obținut doctoratul în 1997 în Murcia, lucrând la învelișul extracelular al ovocitelor numit zona pellucida și la modificările acestuia după fertilizare. A desfășurat activități de cercetare la Queen’s University (Kingston, Canada), Emory University (Atlanta, SUA) și Lehigh University (Bethlehem, SUA). Principalele sale interese de cercetare se concentrează asupra mecanismelor moleculare implicate în specificitatea recunoașterii dintre spermatozoizi și oocit și asupra modului în care oviductul contribuie la maturarea gameților.
Dimitrios Rizos a obținut doctoratul în 2002 la University College Dublin (Irlanda) și a lucrat ulterior ca post-doctorand. În 2004, a obținut un post de cercetare de 5 ani la Departamentul de Reproducere Animală (INIA, Madrid, Spania), iar din 2006 este cercetător senior și șef al laboratorului de Embriologie preimplantațională. El se concentrează pe dezvoltarea embrionară timpurie in vivo și in vitro la mamifere și pe calitatea embrionară; mecanismele care controlează interacțiunile materno-embrionare; factorii responsabili de infertilitate la vacile de lapte; și strategiile de reducere a pierderilor embrionare și de creștere a sarcinilor. A publicat peste 70 de lucrări de mare impact, peste 100 de rezumate, mai multe proiecte de cercetare și a realizat colaborări internaționale.
Pilar Coy este profesor de fiziologie a reproducerii în cadrul Facultății de Medicină Veterinară, Universitatea din Murcia, Spania. Și-a obținut doctoratul în 1990 cu o teză despre fertilizarea in vitro la porci la Universitatea din Murcia. A desfășurat activități de cercetare pre și postdoctorală la Universitatea din Bologna (Italia), la Universitatea California-Davis (SUA), la Institutul Babraham din Cambridge (Marea Britanie), la Universitatea din Tennessee (SUA) și la Institutul de Zoologie (Londra, Marea Britanie). Principalele sale obiective de cercetare se concentrează pe studiul mediului fiziologic din oviduct în timpul fertilizării și pe identificarea factorilor oviductali care afectează interacțiunea gameților.
Literatura citată
,
.
.
:
–
.
,
,
.
.
(
):
.
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
.
,
,
,
,
,
.
.
:
:
.
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
.
.
(
):
.
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
.
,
,
,
.
.
(
):
–
.
,
,
.
(
):
–
.
,
,
,
,
,
,
,
.
.
:
–
.
,
,
,
,
,
,
,
,
,
.
.
:
–
.
,
.
:
–
.
,
,
,
,
,
,
,
.
.
(
):
–
.
,
,
,
.
.
(
):
–
.
,
.
.
:
–
.
,
,
,
,
,
,
.
:
–
.
,
.
.
(
):
–
.
,
.
.
:
–
.
,
,
,
,
,
,
.
.
(
):
–
.
,
,
,
.
.
:
–
.
,
.
. În: Mamiferele:
editor,
. p.
–
.
,
,
,
.
.
:
–
.
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
.
.
(
):
.
,
,
.
.
:
–
.
,
,
,
,
,
.
.
:
–
.
,
,
,
.
.
(
):
–
.
.
.
(
):
–
.
.
.
(
):
–
.
,
.
.
:
–
.
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
.
.
(
):
–
.
,
,
,
,
,
,
,
.
.
:
–
.
.
.
(
):
–
.
,
.
.
(
):
–
.
,
,
,
,
,
,
.
.
:
–
.
,
,
,
,
,
,
,
,
,
.
.
(
):
–
.
,
,
,
,
,
,
.
.
(
):
–
.
,
,
,
,
,
,
.
.
(
):
–
.
,
,
,
.
.
(
):
–
.
,
,
,
.
.
(
):
–
.
,
,
,
,
,
,
.
.
(
):
–
.
,
,
,
,
,
,
,
.
.
(
):
–
.
,
,
.
.
(
):
–
.
.
.
(
):
–
.
,
,
,
,
,
,
.
.
:
–
.
,
,
.
,
,
,
,
.
.
(
):
–
.
,
,
,
,
.
.
(
):
–
.
,
,
,
,
.
.
(
):
–
.
,
,
,
,
,
,
,
,
,
.
.
(
):
–
.
.
. În: A:
editor,
. p.
–
.
.
.
:
–
.
,
.
.
:
–
.
,
,
,
,
,
,
.
.
:
–
.
,
,
,
,
.
.
:
–
.
,
,
,
,
,
,
,
,
.
.
:
–
.
,
,
.
(
):
–
.
,
.
.
(
):
–
.
.
. În: „În:
,
editori,
. p.
–
.
,
,
.
.
(
):
–
.
,
,
,
,
.
.
:
–
.
,
,
,
,
,
,
,
,
.
.
:
–
.
.