Les exigences essentielles pour les essais enzymatiques sont décrites et les erreurs et pièges fréquemment rencontrés ainsi que leur évitement sont discutés. Les principaux facteurs, qui doivent être pris en compte pour le dosage des enzymes, sont la température, le pH, la force ionique et les concentrations appropriées des composants essentiels comme les substrats et les enzymes. La normalisation de ces paramètres serait souhaitable, mais la diversité des caractéristiques des différentes enzymes empêche l’unification des conditions de dosage. Néanmoins, de nombreuses enzymes, en particulier celles provenant de mammifères, ont un pH optimal proche du pH physiologique de 7,5, et la température corporelle d’environ 37 °C peut servir de température de test, bien que pour des raisons expérimentales, on préfère souvent 25 °C. Mais dans de nombreux cas, les caractéristiques particulières de l’enzyme individuelle dictent des conditions d’essai spéciales, qui peuvent s’écarter considérablement des conditions recommandées.

En outre, les valeurs exactes des concentrations des composants de l’essai, tels que les substrats et les enzymes, ne peuvent être données, à moins que des règles générales dépendant du degré relatif de saturation puissent être énoncées. Les règles de réalisation de l’essai enzymatique, la manipulation appropriée, les aspects méthodiques, la préparation des mélanges d’essai et des blancs, le choix de la durée de l’essai, sont discutés et des suggestions pour éviter les erreurs fréquentes et triviales sont données. Les particularités des essais enzymatiques plus complexes, y compris les réactions réversibles et les essais couplés, sont considérées.

Enfin, le traitement des données expérimentales pour estimer l’activité enzymatique est décrit. La procédure de détermination de la vitesse initiale de l’enzyme et sa transformation en unités enzymatiques définies, ainsi que des suggestions pour la documentation des résultats, sont présentées.

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