En okompetitiv hämmare är en hämmare som endast binder till enzymet-substratkomplexet. Dess bindningsställe bildas först när enzymet och substratet har interagerat sinsemellan. Den okompetitiva hämmningen fungerar inte när ytterligare substrat försöker vara inblandade. Komplexet enzym-substrat-hämmare producerar ingen produkt
E + S -> ES
ES + I -> ESI -X-> E + P
Okompetitiv hämmare binder sig till enzym-substrat-komplexet för att hindra enzymet från att reagera med substratet och bilda en produkt, Som sådan fungerar den bra vid högre substrat- och enzymkoncentrationer som substrat binds till enzymer; Bindningen resulterar i minskad koncentration av substratbindning till enzymet, Km och Vmax och ökad bindningsaffinitet hos enzymet till substratet.
E + I -> (genom S) ES + I -> E + P
där E är enzymet, I är inhibitorn, ES är enzym-substratkomplexet och P är produkten.
Denna bindning av substratet ändrar enzymets struktur så att den plats som binder inhibitorn blir tillgänglig. Konkurrensfri hämning minskar den maximala hastigheten samt KM. K,M är koncentrationen av substratet när hastigheten är hälften av den maximala hastigheten enligt Michaelis-Menten-kinetikmodellen. Både Vmax och KM minskas med lika stora mängder. Vmax kommer fortfarande att minska även om bindningen mellan enzym och substrat ökar eftersom det bildas ESI-komplex. ESI-komplex hämmar bildandet av produkten. En icke-kompetitiv hämmare kommer att sänka KM och skapa en bättre bindning mellan enzym och substrat eftersom den endast binder till ES-komplexet. Men ES-komplexet utarmas ständigt när inhibitorn binder, vilket ger upphov till ESI-komplex. För att upprätthålla jämvikten mellan ES- och ESI-komplexen och i enlighet med Le Chateliers princip, skiftar reaktionen därför mot mer ES-bildning där den binder mer substrat till enzymerna för att skapa mer ES. I slutändan leder detta till en lägre KM. En minskad KM indikerar en bättre bindning mellan enzym och substrat eftersom enzymet kan nå halva sin maximala hastighet med lägre substratkoncentration. På sätt och vis är enzym-substratbindningen mycket effektiv eftersom enzymet och substratet har en hög affinitet och interagerar starkt.
.