A minimális gátló koncentráció (MIC) és a minimális baktériumölő koncentráció (MBC) vizsgálata egy vizsgálati anyag hatékonyságát annak a koncentrációnak a függvényében határozza meg, amelynél gátolja a baktérium növekedését (minimális gátló koncentráció, vagy MIC) vagy teljesen elpusztítja (minimális baktériumölő koncentráció vagy MBC) 1 x 106 (egymillió) kihívást jelentő mikroorganizmust 18-20 órás inkubált (35 ± 2°C) expozíció során.
A MIC-módszer az antiszeptikum csökkenő koncentrációinak hatását méri egy meghatározott időtartam alatt a mikrobapopuláció növekedésének gátlása szempontjából. A hatás eléréséhez szükséges gyógyszerkoncentrációt minimális gátló koncentrációként határozzák meg, és általában több százszor vagy ezerszer kisebb, mint a kész gyógyszerformában található koncentráció.
Methods For Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests For Bacteria That Grow Aerobically
A minimális gátló koncentráció (MIC) meghatározásának alapjául szolgáló standard referencia a Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria that Grow Aerobically (jelenleg a CLSI Doc. M7-A9, Clinical Laboratory Standards Institute ) vagy anaerob módon (CLSI Doc. M11-A8).
MIC & MBC vizsgálat áttekintése
A terméket sorozatosan 1:2 arányban hígítják az egyes kihívott mikroorganizmusok növekedésének támogatására alkalmas táptalajban, általában Mueller-Hinton tésztában (MHB) vagy Mueller-Hinton agarban (MHA), hogy a termék hígítási sorozata a táptalajban 1:32 768-ig terjedjen (a BSLI SOP L-2045 szerint). A termék típusától függően azonban előfordulhat, hogy a hígítási sorozatot nem kell eddig elvégezni. A sorozatban lévő csövekhez, amelyek mindegyike a növekedési táptalajban sorozatosan hígított termék 2,0 ml-es aliquotját tartalmazza, most 1,0 ml-t adunk egy kihívó faj 1 x 106 CFU/mL-es szuszpenziójából. A 18-24 órás inkubációs expozíciót követően a kihívó mikroorganizmus/termék/közeg szuszpenziót tartalmazó csöveket megvizsgáljuk, hogy meghatározzuk a termék legnagyobb hígítását (és fordítva, a termék legalacsonyabb koncentrációját), amely teljesen gátolja a mikroorganizmus növekedését, szabad szemmel meghatározva. Ezt a hígítási értéket (és/vagy a termékkoncentráció értékét) a minimális gátló koncentráció értékeként rögzítik.
Ha MBC meghatározásra van szükség, a minimális gátló koncentrációt jelentő hígítási szuszpenzióból és a minimális gátló koncentráció hígítást megelőző két vagy három hígítási szuszpenzióból mért mennyiségeket át kell vinni szilárd táptalajjal ellátott lemezekre, amelyeket ezután 24 órán át 37E± 2E hőmérsékleten inkubálunk. Az inkubációt követően a lemezeket megvizsgáljuk a kihívott mikroorganizmus növekedése szempontjából. A termék azon hígítását (és/vagy a termék koncentrációját), amely nem okoz növekedést, MBC-ként jegyzik fel. Megjegyzendő, hogy a MIC/MBC vizsgálati eljárások elvégezhetők a termék 1:2 sorozathígításával tápanyag-agar közegben (szilárd fázisú vizsgálat) vagy a termék 1:2 sorozathígításával tápanyagleves közegben (szuszpenziós fázisú vizsgálat). Hacsak a szponzor kifejezetten nem kéri az agar-hígítási módszert, a BSLI a MIC-vizsgálatot a makrocsöves tápoldat-hígítási módszerrel végzi, mivel ez sokkal kevésbé anyag- és időigényes.
Vizsgálati új gyógyszer keretében tesztelt termékek
Az IND keretében tesztelendő termékek esetében az FDA a TFM 31444. oldalán egyértelműen meghatározza, hogy milyen mikroorganizmusokat kell használni a termékek in vitro teszteléséhez. A minimális gátló koncentráció vizsgálatához a TFM kimondja, hogy a készterméket, a termék hatóanyagát és a termék hordozóját a 12 Gram-negatív és 11 Gram-pozitív baktériumfaj és a két élesztőgomba fajcsoport (Candida albicans és Candida spp., nem albicans) 25 ATCC törzsével és 25 friss klinikailag izolált törzsével kell megmérgezni. Ez tehát egy nagyon nagy vizsgálatot foglal magában, amely a TFM-ben meghatározott összesen 25 baktérium és élesztőgomba 1250 törzsének vizsgálatát foglalja magában mindhárom termékkonfigurációval szemben.
Az utóbbi években az FDA némileg visszavett ebből a terhes követelményből – bár a készterméket az említett 1250 törzzsel szemben kell vizsgálni, a termék hatóanyagát és a termékhordozót csak a 25 baktérium/élesztőfaj mindegyike öt ATCC törzsével és öt friss, klinikailag izolált törzsével kell megmérettetni. Még így is összesen 250 törzset kell vizsgálni mind a hatóanyag, mind a hordozó esetében, és a teljes TFM MIC-vizsgálat meglehetősen masszív és költséges – összesen 1750 egyedi minimális gátló koncentráció meghatározás. Az FDA néhány fajcserét is engedélyez (pl. a B. fragilis kivételével más Bacteroides-fajok, valamint a koaguláz-negatív Staphylococcus fajok, kivéve a S. epidermidis, S. hominis, S. haemolyticus és S. saprophyticus fajokat), hogy a TFM által megkövetelt egyes fajok ATCC-törzseinek és/vagy klinikai izolátumainak hiányát ellensúlyozza. Elismerve, hogy az alkoholok általában két 1:2 arányú hígítás után már nem antimikrobiális hatásúak, az FDA nem követeli meg a MIC-adatokat olyan termékek esetében, amelyekben az alkohol az egyetlen aktív komponens.
MIC & MBC Proof of Concept in Marketing Purposes
Noha a BSLI több teljes körű Minimális gátló koncentráció vizsgálatot is végzett a TFM által az IND-regisztrált termékekhez előírtak közül, a Minimális gátló koncentráció és esetenként az MBC vizsgálatok többségét a koncepció bizonyítására és marketing célokra végzik. Az ilyen típusú vizsgálatok során a BSLI általában azt ajánlja az ügyfeleknek, hogy a TFM-ben felsorolt mind a 25 faj/törzs ATCC törzseit, valamint mindegyikből egy-egy klinikai izolátumot vizsgáljanak (azaz összesen 50 törzset vizsgáljanak meg).
.