Minimale remmende concentratie (MIC) en minimale bactericide concentratie (MBC) definiëren de potentie van een testmateriaal in termen van de concentratie waarbij het de groei van 1 x 106 (één miljoen) uitdagingsmicro-organismen remt (minimale remmende concentratie, of MIC) of volledig doodt (minimale bactericide concentratie, of MBC) gedurende een periode van 18 tot 20 uur van geïncubeerde blootstelling (35 ± 2°C), of MIC) of 1 x 106 (één miljoen) uitdagingsmicro-organismen volledig doodt (minimale bactericideconcentratie of MBC) gedurende een incubatieperiode van 18 tot 20 uur (35 ± 2°C).
De MIC-methode meet het effect van afnemende concentraties antisepticum over een bepaalde tijdsperiode in termen van remming van de groei van de microbiële populatie. De concentratie van het geneesmiddel die nodig is om het effect te bereiken, wordt gedefinieerd als de minimale remmende concentratie en is gewoonlijk enkele honderden tot duizenden malen lager dan de concentratie die in de afgewerkte doseringsvorm wordt aangetroffen.
Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically
De standaardreferentie die als basis wordt gebruikt voor het uitvoeren van de bepaling van de minimale remmende concentratie (MIC) is de meest recente versie van Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria that Grow Aerobically (momenteel, CLSI Doc. M7-A9, Clinical Laboratory Standards Institute ) of anaeroob (CLSI Doc. M11-A8).
MIC & MBC Test Overview
Het product wordt serieel verdund in een verhouding 1:2 in een groeimedium dat geschikt is voor de groei van elk challenge-micro-organisme, gewoonlijk Mueller-Hinton Broth (MHB) of Mueller-Hinton Agar (MHA), om een verdunningsreeks van product in medium te produceren tot 1:32.768 (per BSLI SOP L-2045). Afhankelijk van het type product is het echter mogelijk dat de verdunningsreeks niet zo ver wordt doorgevoerd. Aan de buisjes in de serie die elk een 2,0 mL aliquot van het in groeimedium serieel verdunde product bevatten, wordt nu 1,0 mL van een 1 x 106 CFU/mL suspensie van een challenge-soort toegevoegd. Na de 18 tot 24 uur geïncubeerde blootstelling worden de buisjes met het uitdagingsmicro-organisme/product/mediumsuspensie onderzocht om de hoogste verdunning van het product (en omgekeerd de laagste concentratie van het product) te bepalen die de groei van het micro-organisme volledig remt, zoals met het blote oog kan worden vastgesteld. Deze verdunningswaarde (en/of productconcentratiewaarde) wordt genoteerd als de minimaal remmende concentratiewaarde.
Indien een MBC-bepaling gewenst is, worden gemeten hoeveelheden overgebracht van de verdunningssuspensie die de minimaal remmende concentratie vertegenwoordigt, en van de twee of drie verdunningssuspensies die aan de verdunning van de minimaal remmende concentratie voorafgaan, naar platen met vast groeimedium, die vervolgens gedurende 24 uur bij 37E± 2E worden geïncubeerd. Na de incubatie worden de platen onderzocht op groei van het uitdagingsmicro-organisme. De verdunning van het product (en/of de concentratie van het product) die geen groei veroorzaakt, wordt genoteerd als de MBC. NB: MIC/MBC-testprocedures kunnen worden uitgevoerd met 1:2 seriële verdunningen van het product in een voedingsbodem (vaste fase-test) of met 1:2 seriële verdunningen van het product in een voedingsbodem (suspensiefase-test). Tenzij de opdrachtgever specifiek de agar-verdunningsmethode vereist, zal BSLI de MIC-tests uitvoeren met behulp van de macrotube-bouillonverdunningsmethode, omdat deze veel minder materiaal- en tijdsintensief is.
Producten getest onder een Investigational New Drug
Voor producten die onder een IND moeten worden getest, specificeert de FDA duidelijk op pagina 31444 van de TFM welke micro-organismen moeten worden gebruikt om de producten in vitro in twijfel te trekken. Voor het onderzoek naar de minimaal remmende concentratie vermeldt de TFM dat het eindproduct, het werkzame bestanddeel van het product en het medium van het product elk moeten worden blootgesteld aan 25 ATCC-stammen en 25 verse klinisch geïsoleerde stammen van elk van de 12 Gram-negatieve en 11 Gram-positieve bacteriesoorten en de twee soorten gistgroepen (Candida albicans en Candida spp., niet albicans). Het gaat dus om een zeer groot onderzoek waarbij 1.250 stammen van de in totaal 25 bacteriën en gisten die in de TFM worden gespecificeerd, worden getest tegen elk van de drie productconfiguraties.
De laatste jaren heeft de FDA enigszins afstand genomen van deze zware eis – hoewel het eindproduct moet worden getest op de 1.250 stammen, hoeven, zoals gezegd, het actieve hoofdbestanddeel en het medium van het product slechts te worden getoetst aan vijf ATCC-stammen en vijf verse klinisch geïsoleerde stammen van elk van de 25 bacterie/gistsoorten. Toch zijn dit in totaal 250 stammen die zowel op het actieve bestanddeel als op het medium moeten worden getest, en de totale TFM MIC-studie is vrij omvangrijk en duur – in totaal 1.750 afzonderlijke minimale remmende concentratiebepalingen. De FDA staat ook enkele soortsubstituties toe (b.v. andere Bacteroidesoorten dan B. fragilis, en andere coagulase-negatieve Staphylococcus-soorten dan S. epidermidis, S. hominis, S. haemolyticus, en S. saprophyticus) om tegemoet te komen aan de schaarste van ATCC-stammen en/of klinische isolaten van sommige van de door de TFM vereiste soorten. En omdat de FDA erkent dat alcoholen in het algemeen niet antimicrobieel actief zijn na ongeveer twee 1:2 verdunningen, vereist zij geen MIC-gegevens voor producten waarin een alcohol het enige actieve bestanddeel is.
MIC & MBC Proof of Concept in Marketing Purposes
Hoewel BSLI verscheidene van de door de TFM vereiste volwaardige Minimum Inhibitory Concentration studies heeft uitgevoerd voor IND-geregistreerde producten, worden de meeste Minimum Inhibitory Concentration en incidentele MBC studies uitgevoerd voor proof-of-concept en marketing doeleinden. In dit soort studies beveelt de BSLI over het algemeen aan dat ATCC-stammen van alle 25 soorten/stammen die in de TFM worden genoemd, plus een klinisch isolaat van elk, worden getest (d.w.z. in totaal 50 uitdagingsstammen).