Een niet-competitieve remmer is een remmer die zich alleen bindt aan het enzym-substraatcomplex. De vorming van zijn bindingsplaats vindt alleen plaats wanneer het enzym en het substraat met elkaar hebben gereageerd. De niet-competitieve remming werkt niet wanneer extra substraten een rol proberen te spelen. Het enzym-substraat-remmercomplex levert geen product op
E + S -> ES
ES + I -> ESI -X-> E + P
Uncompetitieve remmer bindt zich aan het enzym-substraatcomplex om te voorkomen dat het enzym met het substraat reageert en er product wordt gevormd, als zodanig werkt het goed bij hogere substraat- en enzymconcentraties die substraten aan enzymen binden; de binding resulteert in dalende concentratie van substraatbinding aan enzym, Km, en Vmax, en stijgende bindingsaffiniteit van enzym aan substraat.
E + I -> (via S) ES + I -> E + P
waar E het enzym is, I de remmer, ES het enzym-substraatcomplex, en P het product.
Door de binding van het substraat verandert de structuur van het enzym, waardoor de bindingsplaats van de remmer beschikbaar wordt. Bij niet-concurrerende remming neemt de maximale snelheid af, evenals de KM. K,M is de concentratie van het substraat wanneer de snelheid de helft bedraagt van de maximumsnelheid, gebaseerd op het Michaelis-Menten-kinetiekmodel. Zowel Vmax als KM worden met gelijke hoeveelheden verminderd. Vmax zal nog steeds lager zijn, ook al is de enzym-substraatbinding verhoogd omdat er ESI-complexen worden gevormd. ESI-complexen remmen de vorming van het product. Een niet-concurrerende remmer zal de KM verlagen en een betere enzym-substraatbinding tot stand brengen omdat hij alleen aan het ES-complex bindt. Maar het ES-complex wordt voortdurend uitgeput naarmate de remmer bindt, waardoor ESI-complexen ontstaan. Om het evenwicht tussen ES- en ESI-complexen in stand te houden en volgens het principe van Le Chatelier, verschuift de reactie dus in de richting van meer ES-vorming, waar het meer substraat aan de enzymen zal binden om meer ES te creëren. Uiteindelijk leidt dit tot een lagere KM. Een lagere KM wijst op een betere enzym-substraatbinding omdat het enzym met minder substraatconcentratie de helft van zijn maximale snelheid kan bereiken. In zekere zin is de enzym-substraatbinding zeer efficiënt omdat het enzym en het substraat een hoge affiniteit hebben en sterk op elkaar inwerken.