Die grundlegenden Anforderungen an Enzymtests werden beschrieben und häufig auftretende Fehler und Fallstricke sowie deren Vermeidung werden diskutiert. Die wichtigsten Faktoren, die bei der Untersuchung von Enzymen berücksichtigt werden müssen, sind Temperatur, pH-Wert, Ionenstärke und die richtigen Konzentrationen der wesentlichen Komponenten wie Substrate und Enzyme. Eine Standardisierung dieser Parameter wäre wünschenswert, aber die Vielfalt der Eigenschaften der verschiedenen Enzyme verhindert eine Vereinheitlichung der Testbedingungen. Dennoch haben viele Enzyme, insbesondere solche aus Säugetieren, ein pH-Optimum nahe dem physiologischen pH-Wert von 7,5, und die Körpertemperatur von etwa 37 °C kann als Testtemperatur dienen, obwohl aus experimentellen Gründen häufig 25 °C bevorzugt wird. In vielen Fällen diktieren jedoch die Besonderheiten des einzelnen Enzyms spezielle Assay-Bedingungen, die erheblich von den empfohlenen Bedingungen abweichen können.

Außerdem können keine genauen Werte für die Konzentrationen der Assay-Komponenten wie Substrate und Enzyme angegeben werden, es sei denn, es können allgemeine Regeln in Abhängigkeit vom relativen Sättigungsgrad angegeben werden. Regeln für die Durchführung des Enzymtests, die richtige Handhabung, methodische Aspekte, die Herstellung von Testmischungen und Leerwerten, die Wahl des Testzeitpunkts werden erörtert, und es werden Vorschläge zur Vermeidung häufiger und trivialer Fehler gemacht. Besonderheiten von komplexeren Enzymtests, einschließlich reversibler Reaktionen und gekoppelter Tests, werden berücksichtigt.

Schließlich wird die Behandlung experimenteller Daten zur Abschätzung der Enzymaktivität beschrieben. Das Verfahren zur Bestimmung der anfänglichen Enzymgeschwindigkeit und deren Umrechnung in definierte Enzymeinheiten sowie Vorschläge zur Dokumentation der Ergebnisse werden vorgestellt.